PCR - MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE
Chcete:
- určit sekvenci pro identifikaci mutací (bodové mutace (SNP), inserce, delece)
- vyhodnotit příbuzenské vztahy mezi jedinci nebo populacemi
- prokázat přítomnost daného organismu v biologickém vzorku
- provést klonování do expresního vektoru pro syntézu rekombinantní bílkoviny...
Tyto analýzy obvykle vyžadují amplifikaci genetického materiálu pomocí enzymatické reakce nazývané PCR (Polymerázová řetězová reakce). Tato reakce se obvykle provádí z DNA. Pro některé specifické aplikace se jako výchozí materiál používá cDNA získaná reverzní transkripcí RNA.
Princip metody
Molekuly DNA, ve svém přirozeném stavu, se skládají ze dvou komplementárních vláken. Přechod na teplotu vyšší než 94 °C způsobuje oddělení obou vláken DNA a destrukci sekundárních struktur (krok denaturace).